初次证明，ctDNA检测无望替换骨髓样本诊断监测

近期，中国医学科学院血液病病院竺晓凡传授团队与金橡医学配合研究发觉ctDNA与骨髓在分子变异检测方面具有同等性，且ctDNA具有发觉潜伏变异位点的上风，证明ctDNA动态MRD监测在儿童急性髓系白血病精准治疗的应用代价，该研究结果以长文情势颁发于Frontiers in Oncology（题：Targeted Next-Generation Sequencing of Circulating Tumor DNA, Bone Marrow, and Peripheral Blood Mononuclear Cells in Pediatric AML）。

急性髓系白血病（AML）的发病率占儿童白血病的25%，是一种连忙希望性造血体系恶性肿瘤，其特性是肿瘤原始细胞的分解停滞和特别增殖，其5年总生存（OS）仅60%-70%。随着二代测序的遍及应用，儿童AML的基因图谱变得越发清楚，而基因图谱的差别反应出了AML的异质性，精准的基因位点对付AML的预后危险分层和靶向治疗选择极为紧张。本研究展现轮回肿瘤 DNA(ctDNA) 作为一种非骨髓侵入性检测样原来源， 在儿童 AML 患者分子诊断及微小残留白血病监测中的作用，为淘汰儿童AML患者的侵入性骨髓穿刺提供有力证据。

本研究纳入了20名儿童（年事 < 18 岁）初诊AML患者，所有患者在诊断时同时进行了骨髓（BM）、外周血单核细胞（PBMC）和外周血循环肿瘤DNA（ctDNA）靶向测序。

在 BM 和 ctDNA 中共判定出 219 个突变，此中在两种样本均检出的有164 个突变（74.88%），包罗 121 个 SNV（75.63%）和 43 个 InDel（72.88%）。对付单个个别来说，在两种样本中均可检测到的突变位点数量高度同等（R2 = 0.816，P <0.0001），平均可达8个。这 164 个共有突变位点的突变频率（VAF）高度一致（R2 = 0.945；P<0.0001）。

综上所述，在全部患者中共检测到 37 个具有临床意义的突变基因，涉及 109 个突变位点（BM 93 个，ctDNA 100 个）。此中在两种样本中共检测到 84个 (77.06%) 突变，且VAF 评估具有高度同等性（R2 = 0.895，P<0.0001）。

图1. BM和ctDNA中检测到的突变同等性

图2. 单个个别中用BM及ctDNA检出的突变同等性

图3. BM和ctDNA共有突变位点的突变频率呈高度同等

阐发BM、ctDNA 和 PBMC 三样本中具有临床意义的突变

在三种样本中同时检测到 65.79% (75/114) 具有临床意义的突变，在 ctDNA 和 BM 中检测到 9 个突变，在 PBMC 和 BM 中检测到 2 个突变。而VAF 评估表现高度同等性的 5 名患者，在他们的三种样本中检测到具有临床意义的雷同突变基因；而别的15名患者除了三种样本配合检测突变外，别的突变重要在 BM 或 ctDNA 中检测到，而这些效果评释PBMC不克不及全面反应骨髓的突变。

图4. 用BM和ctDNA样本监测AML患儿MRD（微小残留病）的比力

在20 名初诊时 ctDNA 检测为阳性的患儿中拔取5名患者，针对骨髓和ctDNA两种样本同时监测AML患儿MRD状态时，发觉1名患儿显现复发，但值得细致的是，ctDNA动态监测比BM复发提前2个月发觉；而别的4名无复发患者ctDNA一连监测表现，化疗后ctDNA样本中肿瘤基因完全扫除，为纯阴性效果，且末次随访时仍为阴性。这些效果评释ctDNA动态监测大概是AML患儿MRD监测的有用东西。

图5. AML患儿担当化疗后的ctDNA状态及临床病程

结论

本研究初次展现：1）ctDNA可用于检测儿童急性髓系白血病的基因差别且与骨髓检测突变基因的同等性较高；2）在突变频率方面，ctDNA具有骨髓和单核细胞均未检测到潜伏突变的代价；3）ctDNA动态监测可有用反应AML患儿MRD希望。

文章第一作者为阮敏副主任医师，刘立鹏主治医师为配合第一作者，通讯作者为竺晓凡主任医师。