液相色谱柱的布局,徒弟级另外也要明白

2022-11-17 10:14:11 作者:一身温柔病
导读:液相色谱柱的结构,师傅级别的也要懂得,液相色谱柱液相色谱柱的分离其作用是在填料与流动相之间进行的,柱子的分类是根据填料类型决定的。正相柱:多以硅胶为柱填料。根据外...
反相色谱柱使用中需要注意什么

液相色谱柱

液相色谱柱的分散其作用是在填料与流淌相之间举行的,柱子的分类是依据填料范例决定的。

正相柱:多以硅胶为柱填料。依据外型可分为无定型和球型两种,其颗粒直径在3-10μm的范畴内。另一类正相填料是硅胶外貌键合— CN,-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。

色谱柱安装时需要注意的事项

反相柱:重要因此硅胶为基质,在其外貌键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。

常用的其他的反相填料另有键合C8、C4、C2、苯基等,其颗粒粒径在3-10μm之间。

一、色谱柱的安置:

a、拆开柱包装盒,确认色谱柱的范例、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。

b、拧下柱两头讨论的密封堵头放回包装盒供备用。

c、 按柱管上标示的流淌相流向,将色谱柱的入口端通过毗连管与进样阀出口相毗连(如条件许可,发起在柱前利用爱护柱);柱的出口与检测器毗连。毗连管是外径为1.57mm、内径为0.1-0.3mm的不锈钢管。毗连管的两头均有空心螺钉及密封用压环。在接受时必然要想法低落柱外去世体积。毗连管通过空心螺钉、压环后只管即便用力插究竟,然后顺时针拧紧空心螺钉,直到拧不动为止,再用扳手陆续顺时针拧1/4-1/2圈,牢记不要用力过大。如色谱柱通过流淌相加压后有漏液征象,请用扳手陆续顺时针拧1/4圈,直至不漏液为止。

二、液相色谱柱的利用:

色谱柱在利用前,兰交举行柱的性能测试,并将效果储存起来,作为以后评价柱性能改变的参考。但要细致:柱性能大概因为所利用的样品、流淌相、柱温等条件的差别而有所差别;别的,在做柱性能测试时是根据色谱柱出厂陈诉中的条件举行(出厂测试所利用的条件是至佳条件),只有如许,测得的效果才有可比性。

1、样品的前处置惩罚:

a、兰交利用流淌相溶解样品。

b、利用予处置惩罚柱撤除样品中的强极性或与柱填料孕育发生不行逆吸附的杂质。

c、利用0.45μm的过滤膜过滤撤除微粒杂质。

2、流淌相的配制:

液相色谱是样品组分在柱填料与流淌相之间质量互换而到达分散的目标,是以要求流淌相具备以下的特点:

a、流淌相对样品具有必然的溶解本领,包管样品组分不会沉淀在柱中(或永劫间保存在柱中)。

b、流淌相具有必然惰性,与样品不孕育发生化学反响(特别情形除外)。

c、流淌相的黏度要只管即便小,以便在利用较长的阐发柱时能得到好的分散成效;同时低落柱压降,延伸液体泵的利用寿命(可运用进步温度的要领低落流淌相的黏度)。

d、流淌相的归天性子要与利用的检测器相顺应。如利用UV检测器,兰交利用对紫外汲取较低的溶剂配制。

e、流淌相沸点不要太低,不然简单孕育发生气泡,导致试验无法举行。

f、在流淌相配制好后,必然要举行脱气。撤除溶解在流淌相中的微量气体既有利于检测,还可以防备流淌相中的微量氧与样品产生作用。

3、流淌相流速的选择:

因柱效是柱中流淌相线性流速的函数,利用差别的流速可得到差别的柱效。对付一根特定的色谱柱,要寻求至佳柱效,兰交利用至佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱,流速普通选择1ml/min,对付内径为4.0mm柱,流速0.8ml/min为佳。

当选用至佳流速时,阐发时间大概延伸。可采纳转变流淌相的洗涤强度的要领以收缩阐发时间(如利用反相柱时,可得当增添甲醇或乙腈的含量)。

细致:

A、因为甲醇便宜,对付反相柱推举利用甲醇体系(一定利用乙腈的场所除外)。

B、对付正相柱推举利用沸程为30-60℃的煤油醚或提纯后的己烷作流淌相,没有提纯的己烷不得利用。用水兰交利用超纯水(电阻率大于18兆欧),去离子水及双蒸水中含有酚类杂质,有大概影响阐发效果。

C、含水流淌相兰交在试验前配制,尤其是炎天利用缓冲溶液作为流淌相不要留宿。兰交参加叠氮化钠,防备细菌生长。

D、流淌相要求利用0.45μm滤膜过滤,撤除微粒杂质。

E、利用HPLC级溶剂配制流淌相,利用符合的流淌相可延伸色谱柱的利用寿命,进步柱性能。

如今应该知道液相色谱柱布局是什么了吧?

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