和别的阐发仪器一样，你若想让HPLC很好地为你事情、得到可靠的数据，起首你要调养好它，使它处于一个精良的待机状态，如许你操纵它举行阐发时就可以比力顺遂地得到抱负的效果。并且精良范例的操纵风俗可以延伸仪器利用寿命。家人们在学校或担当仪器公司培训的时间，老师或工程师会提出许多的操纵细致事变。但如果总结归纳一下，最紧张的有三点：脱气、过滤和冲洗。

01脱气

流淌相脱气可以幸免HPLC体系出题目，从而顺遂得到抱负的数据。HPLC体系内是不盼望有气泡存在的。HPLC泵在运送液体时要孕育发生很大的气力，因为气体的压缩比与液体相比大的多，因而当气泡存在时，你将观看到刹时的流速低落和体系压力降落。假如这个气泡充足大，液相泵将不克不及运送任何溶剂，并且假如压力低于预先设定的压力低限，泵将制止事情。有些泵设计可以很好地清除气泡，而也有一些泵设计当气泡存在时将制止运转。

当一个气泡通过输液泵时，因为体系压力大，气泡通常会溶解在流淌相溶液中，随流淌雷同过柱子。但是到达检测器流畅池时体系压力又规复到了大气压，因而气泡大概在检测器流畅池中又展现，在色谱图上会显现不纪律的毛刺。

紫外/可见光（UV/VIS）检测器的液相色谱图中的噪音毛刺通常是气泡进入并通过流畅池的征兆。别的，对付使用待测物质在电极外貌产生氧化还原反响引起电流改变而举行检测的电化学（EC）检测器，对流淌相中的溶解氧的存在也非常敏锐。别的，气泡的存在偶然还会导致保存时间不重现。

以是，一定细致消除流淌相中的氛围，而且还应幸免氛围由管路（如PTFE管）渗入渗出进流淌相中。

常用的脱气要领

1、吹氦脱气法。

使用氦气在液体中溶解度比氛围低的特性，在0.1MPa压力下，以约60 mL/min流速通入流淌相储液容器中10～15min，可以很有用地从流淌相中清除溶解的氛围，能清除靠近80%的氧气。采纳一个高效漫衍式喷射流装置，一体积的氦气可从流淌相中将等体积的险些全部气体清除。这意味着1L氦气通过1L流淌相就可完成排气这个事情。这种脱气要领固然好，但我们国内氦气代价较高，很少有试验室采纳此要领。

2、加热回流法。

此法的脱气成效较好。在操纵时要细致冷凝塔的冷却服从，不然溶剂会丢失，混淆流淌相的比例会有改变。

3、抽真空脱气法。

此法可利用真空泵，降压至0.05～0.07MPa即可撤除溶解的气体。但是因为真空脱气会使混淆溶剂构成产生改变，从而影响到试验的重现性，是以多用于单溶剂体系的简洁阐发。

4、超声波脱气法。

将欲脱气的流淌相置于超声波洗濯器中，用超声波震动10～20min。此法的脱气成效最差。

5. 在线脱气法。

如今商品的HPLC仪器，均可配在线脱气机。在线脱气利用简洁，低妨碍，有用。发起购置仪器时必然要购置，有的公司是作为选购件，以是与仪器公司谈设置装备摆设时应与公司确认。

02过滤

任何颗粒物进入HPLC体系后都市在柱子入口端被筛板挡住，最终的效果是将柱子阻塞，体现出的特性是体系压力增添并使色谱峰变形。是以，要接纳种种防备步伐，包罗操纵步调和商品仪器自身的种种过滤设计，高兴防备或淘汰颗粒物进入HPLC体系中，从而延伸仪器和色谱柱的利用寿命，并进步数据的可靠性。在HPLC体系中，颗粒物的重要泉源有三个途径：流淌相、被测样品和仪器体系部件的磨损物。

1、流淌相

假如流淌相均由高效液相色谱级溶剂构成，流淌相没有须要过滤。这是由于高效液相色谱级的有机溶剂，比方乙腈、甲醇等，在制造的工艺历程中都已颠末了0.2 μm微孔滤膜过滤。同样的，无论你是买的HPLC级的水照旧在试验室利用超纯水净化体系制备的水，最终一步也是通过0.2 μm微孔滤膜。然而，假如有任何一种缓冲液中参加了固体物，比方磷酸盐，流淌相过滤将是须要的一个步调。固然缓冲盐大概是可溶解的、高纯的，但它照旧大概含有颗粒物质，比方在盖试剂瓶的塑料内盖时，塑料瓶盖子与瓶口边沿挤压就会孕育发生塑料颗粒。在这种情形下，添加的一种固体物大概完全溶解了，但是少量杂质颗粒存在于流淌相中成为残渣。
流淌雷同过0.45 μm微孔滤膜过滤对付从流淌相中撤除全部颗粒物是一个有用要领。0.2 μm微孔滤膜也可以用，但是它们就这个应用而言并不比0.45μm微孔滤膜更有用，并且它的过滤速率会更慢，格外是当试验室利用的试剂和水的质量不太好时。发起试验室在编写订定他们流淌相制备尺度操纵步伐（SOPs）时划定，可以鉴戒国际上同类试验室的划定，即：

流淌相制备仅采纳HPLC级液体时不必要过滤，反之全部流淌相构成在利用前一定过滤。

在毗连储液瓶和泵的输液管的末了入口采纳下沉式过滤器（常见材质有熔融玻璃砂芯滤板和微孔金属的两种）也是很紧张的。这个过滤器的规格为≥10 μm的微孔物质，以是它不克不及代替流淌相过滤步调，但是它能撤除体系中的灰尘并包管储液瓶、输液管利用的可靠性。

2、被测样品

液相体系中的第二个颗粒物泉源是被测样品。一些试验室在将他们的样品安排在主动进样器盘（或手动进样）曩昔，全部样品都先通过一个0.45 μm针筒式过滤器过滤。这是一个有用撤除被测样品中颗粒物的要领。但是这个历程也有一点必要存眷：你利用了针筒式过滤器就不行能100%得到通过过滤器的被测样品，总会有或多或少的丢失。

丢失来自如许几方面：过滤器滤膜的吸附、过滤器滤出的颗粒物上的吸附、针筒式滤膜过滤器与针筒毗连处的渗漏等。假如有丢失，过滤后液体中被测物的含量或浓度与原根本样液的含量或浓度还雷同吗？

这个题目普通必要通过试验确认。确认这步是要增添事情量和用度的。过滤器的利用是一种斲丧，每个过滤器的代价从几元到十几元。但在做食品中残留物阐发时，因为基质大多比力庞大，以是过滤这步已成为不行或缺的一步。在现实阐发事情中，普通检测每一组样品会带一个外标、一个添加接纳或是质控样品，以是，只要终极检测时得到的信噪比能餍足检出限要求，可将这步视为体系偏差而纰漏。

3、仪器体系部件的磨损物

最终，在HPLC体系中颗粒物的另一个重要泉源是输液泵密封垫和进样阀扭转轴的磨损。关于输液泵密封垫的磨损调换有两种差别发起。
第一种发起以为，在普通试验室中输液泵密封垫通常利用寿命为六个月到一年，是以发起半年或一年调换这些密封垫，试验室应基于上述看法订定定期防备性维护打算。

该看法以为：与输液泵密封垫颗粒阻塞柱子而调换新柱子的用度相比，调换密封垫的用度低些。一些输液泵有玻璃砂芯或筛网，可在流路中滤失从泵密封垫磨损下来的颗粒物，防备这些颗粒物随流淌相流至柱头。如有这种装置应查阅输液泵操纵手册，检察推举的这种过滤器洗濯或调换的隔断。另一种发起则以为，原装密封垫的密封成效最好，调换今后简单引起流淌相渗漏。以是，只要不漏液就不要方便调换密封垫。

03冲洗

使HPLC体系精良运行的第三个要点是连结体系的干净。你必要存眷流淌相流经该体系的全部地方，对付这些地方每每性的冲洗，将使你的体系连结在“Ready”状态。

1、流淌相储液瓶

起首要每每洗濯流淌相储液瓶，大概每做一批新样品调换一次流淌相。一个脏的储液瓶将会污染注入的流淌相。发起储液瓶中缓冲液利用时间不要凌驾一周，而有机溶剂利用时间不要凌驾一个月。也有人发起储液瓶中连结用溶剂满盈，直到调换阐发要领储液瓶需调换新溶剂（流淌相构成产生改变）时，将旧溶剂倒失调换新溶剂，如许胜于将溶剂用完。但这对付阐发样品量少的试验室而言彷佛有些白费。仪器公司的工程师发起储水瓶的水要每天换，每周瓶子还应该用异丙醇洗濯一次。有的试验室则在水里参加0.1～1 mM的甲酸按捺微生物的生长。这些做法看起来有些繁琐，但却能起到“磨刀不误砍柴工”作用。

2、泵

接下来冲要洗的是泵。万万不要一阐发完冲几分钟后就停泵，格外是当流淌相中含有难挥发的缓冲液（如磷酸盐）时。假如仪器不是一连利用，当流淌相蒸发时，难挥发物就会粘在活塞密封垫的外貌，难挥发物将形成固形物沉淀。这是泵密封垫磨损和单向阀渗漏的重要缘故原由之一。以是，无论利用是非，在停泵曩昔必然要用非缓冲液流淌相冲洗泵在半个小时以上，如果流淌相中有难挥发缓冲盐则发起冲洗的时间应该更长些。

3、主动进样器

主动进样器也要按划定洗濯。如今的仪器多配有主动进样器的冲洗液瓶，通常只要细致准时调换、增补冲洗液即可。主动进样器用的洗涤液也要采纳与流淌相雷同的方法处置惩罚，并依据溶剂的有用期和划定，洗濯储液瓶或调换洗涤液。如今的主动进样器设置、操纵都很简洁，假如时间许可（格外是使用夜间运行），每次阐发完后设置进1、2针纯溶剂（如甲醇、乙腈），也是一个好做法。

4、色谱柱

对柱子的污染是随利用时间而增添。通常体现是：运行走基线时在记载的色谱图中基线噪音增添，泵压也增添。办理这个题目的最有用要领便是在每一批样品阐发完结后或预备卸下柱子时用大量的流淌相冲洗柱子（比方，甲醇、乙腈和水）。用梯度冲洗成效更好，详细的比例要依据柱子的阐明书和性子而定。

5、检测器

假如是正常利用，检测器将依据其性子并根据阐明书划定举行洗。比方UV/VIS检测器或FL检测器，在对柱子和体系举行冲洗时也就一同对检测器流畅池中污染物举行了洗濯。但是蒸发光检测器或质谱仪则必要根据阐明书举行定期洗濯。这些检测器在利用时会有难挥发污染物沉积，如质谱仪离子源的喷针、毛细管、锥孔板、预四极等部件，因而必要定期洗濯。并且对连有这些检测器的体系冲洗时，最好与这些检测器断开，以淘汰对检测器的污染。

04总结

总之，试验室平常利用的液相色谱仪如果能专心做好这三项事情——脱气、过滤和冲洗，你的仪器可以得到精良的防备性维护，利用时就会感触比力随手。固然，在现实操纵时碰到的题目并没有这么简洁，但这三个精良风俗将是精确操纵、利用HPLC体系的底子。